فلوسایتومتری

فلوسایتومتری تکنیکی است که برای شناسایی و اندازه گیری ویژگی های فیزیکی و شیمیایی جمعیتی از سلول ها یا ذرات استفاده می شود. فلوسیتومتری فناوری است که به سرعت سلول ها یا ذرات را هنگامی که از مقابل لیزرهای منفرد یا چندگانه عبور می کنند در حالی که در محلول بافری مبتنی بر نمک معلق هستند، تجزیه و تحلیل می کند. هر ذره برای پراکندگی نور مرئی و یک یا چند فلورسانس تجزیه و تحلیل می شود.

آنچه در ادامه می‌خوانید:

چرا آزمایش فلوسایتومتری درخواست می شود؟

  • ارزیابی لنفوسیتوزهای با علت نامشخص
  • شناسایی اختلالات لنفوپرولیفراتیو سلول های B و T شامل خون و مغز استخوان
  • تمایز لوسمی لنفوبلاستیک حاد (ALL) از لوسمی حاد میلوئیدی (AML)
  • تعیین زیرگروه ایمونولوژیک ALL
  • تشخیص لنفوسیت های واکنشی و هیپرپلازی لنفوئیدی از لنفوم بدخیم
  • تمایز بین لنفوم بدخیم و لوسمی حاد
  • طبقه بندی فنوتیپی اختلالات لنفوپرولیفراتیو مزمن سلول B و T، از جمله لوسمی لنفوسیتی مزمن، لنفوم سلول گوشته و لوسمی سلول مویی
  • تشخیص AML با حداقل شواهد مورفولوژیکی یا سیتوشیمیایی تمایز
  • شناخت پلاسماسل های مونوکلونال
  • برای کمک به درمان لوسمی ها
  •  برای کمک به تعیین پیش آگهی
  •  برای شناسایی و ارزیابی سلول های سرطان خون یا لنفوم که پس از درمان یا عود بیماری باقی می مانند

چه زمانی آزمایش فلوسایتومتری بایستی انجام شود؟

  • هنگامی که علائم و نشانه هایی دارید که پزشک فکر می کند، ممکن است به دلیل سرطان خون یا لنفوم باشد.
  •  برای کمک به طبقه بندی نوع لوسمی یا لنفوم
  • شناسایی گزینه های درمانی و پیش بینی دوره احتمالی بیماری
  •  برای ارزیابی اینکه آیا درمان موثر بوده است یا تشخیص بیماری که پس از درمان باقی مانده یا عود می کند

نمونه مورد نیاز برای آزمایش فلوسایتومتری:

  • ظرف/لوله: لوله با درب بنفش(حاوی ضد انعقادد EDTA)/لوله با درب زرد(حاوی ضد انعقاد اسید سیترات دکستروز ACD)/ لوله با درب سبز حاوی هپارین/
  • نوع نمونه: خون کامل/ مغز استخوان/ مایع مغزی نخاعی/ دیگر مایعات بدن
  • حجم نمونه:
  1. خون: 3 میلی لیتر
  2. مغز استخوان، مایع نخاعی: 1 میلی لیتر
  3. مایع حاصل از سروز افیوژن: 5 میلی لیتر
لوله های مورد نیاز برای آزمایش فلوسایتومتری
لوله های مورد نیاز برای آزمایش فلوسایتومتری

شرایط-نگهداری-دمایی-نمونه-آزمایش-فلوسایتومتری(Flow-Cytometry)مطلب پیشنهادی:لوله های آزمایش و ضد انعقادهاشرایط-قبول-یا-رد-نمونه-آزمایش-فلوسایتومتری(Flow-Cytometry)نمونه خون با وارد کردن یک سوزن در رگ به دست می آید. یک نمونه مغز استخوان ممکن است توسط یک پزشک آموزش دیده از استخوان لگن جمع آوری شود. گاهی اوقات، نمونه بافتی، مانند غدد لنفاوی، با استفاده از بیوپسی یا آسپیراسیون با سوزن ظریف (FNA) به دست می آید. نمونه‌های مایع بدن از طریق جمع‌آوری مایع در یک ظرف یا با وارد کردن یک سوزن به داخل حفره بدن بخشی از مایع با سرنگ به دست می‌آیند.

حجم مایع لازم برای فنوتیپ کردن لنفوسیت ها یا بلاست ها در مایع نخاعی به تعداد سلول ها در نمونه بستگی دارد. تعداد سلول ها باید تعیین و همراه با نمونه ارسال شود. معمولاً 1 تا 1.5 میلی لیتر مایع نخاعی کافی است. اگر تعداد سلول ها زیاد باشد می توان از حجم های کوچکتر استفاده کرد. اگر تعداد سلول ها کمتر از 10 سلول در میکرولیتر باشد، ممکن است به حجم بیشتری از مایع نخاعی نیاز باشد. هنگامی که تعداد سلول ها به کمتر از 5 سلول در میکرولیتر می رسد، آنالیز ایمونوفنوتیپی ممکن است موفقیت آمیز نباشد.

نمونه گیری مغز استخوان

آسپیراسیون مغز استخوان و/یا روش بیوپسی توسط یک متخصص مراقبت های بهداشتی آموزش دیده انجام می شود. هر دو نوع نمونه اغلب از استخوان لگن (کرست ایلیاک) جمع آوری می شوند. در برخی موارد، جمع آوری مغز استخوان ممکن است از استخوان سینه (استرنوم) جمع آوری شود.

تقریباً به همه بیماران قبل از عمل یک آرام‌بخش خفیف داده می‌شود، سپس از آنها خواسته می‌شود که برای جمع‌آوری روی شکم یا پهلو دراز بکشند. محل با یک ضد عفونی کننده تمیز می شود و با یک بی حس کننده موضعی تزریق می شود و آن را به عنوان یک میدان جراحی معمولی درمان می کند. هنگامی که محل بی حس شد، پزشک یک سوزن را از طریق پوست و داخل استخوان وارد می کند.

برای آسپیراسیون، یک سرنگ به سوزن وصل می شود و مایع مغز استخوان آسپیره می شود. برای بیوپسی مغز استخوان، از یک سوزن مخصوص برای جمع آوری هسته (نمونه استوانه ای) استخوان و مغز استفاده می شود. حتی اگر پوست بیمار بی حس شده باشد، بیمار ممکن است در طول این روش ها احساس فشار کوتاه اما ناراحت کننده (کشیدن و/یا هل دادن) کند.

آسپیراسیون مغز استخوان
آسپیراسیون مغز استخوان

پس از بیرون کشیدن سوزن، یک باند استریل روی محل قرار داده می شود و فشار وارد می شود. در برخی موارد، این روش ممکن است در لگن مقابل (مغز استخوان دو طرفه) تکرار شود، که اغلب به عنوان بخشی از اقدامات تشخیصی اولیه انجام می شود. سپس به بیمار دستور داده می شود که آرام دراز بکشد تا زمانی که فشار خون، ضربان قلب و دمای بدنش نرمال شود و سپس محل جمع آوری را برای حدود 48 ساعت خشک و پوشیده نگه دارد.

مطلب پیشنهادی: روش های مختلف جمع آوری نمونه های آزمایشگاه

آمادگی قبل از انجام آزمایش فلوسایتومتری:

به آمادگی خاصی نیاز ندارد

نام روش انجام آزمایش فلوسایتومتری

ایمونوفنوتایپینگ

فلوسیتومتری چیست و چگونه انجام می شود؟

فلوسیتومتری یک روش آزمایشگاهی است که برای شناسایی و شمارش سلول های خاص استفاده می شود. این روش همچنین می تواند اجزای خاصی را در سلول ها شناسایی کند. این اطلاعات بر اساس ویژگی های فیزیکی و/یا نشانگرهایی به نام آنتی ژن در سطح سلول یا درون سلول هایی است که منحصر به آن نوع سلول هستند. این روش ممکن است برای ارزیابی سلول های خون، مغز استخوان، مایعات بدن مانند مایع مغزی نخاعی (CSF) یا تومورها استفاده شود.

فلوسیتومتری شامل چندین مرحله است:

نمونه ای از سلول ها در یک مایع معلق است.

قبل از آزمایش و بسته به سلول‌های مورد تجزیه و تحلیل، نمونه ممکن است با رنگ‌های مخصوص برای تعریف بیشتر زیرشاخه‌های سلولی انکوبه شود. رنگ ها (فلوروکروم ها) که استفاده می شوند به آنتی بادی های مونوکلونال متصل می شوند که به سلول های خاص یا اجزای کلیدی سلول ها متصل می شوند.

نمونه حاوی سلول ها از ابزاری به نام فلوسیتومتر عبور می کند. در دستگاه، مایعی که سلول‌ها در آن معلق هستند از کانال‌های بسیار باریکی عبور می‌کند تا سلول‌ها هنگام عبور از آشکارساز(ها) در یک فایل منفرد سازماندهی شوند. این عمل با سرعت بالا (صدها تا هزاران سلول در ثانیه) انجام می شود.

فلوسیتومتر شامل یک یا چند لیزر و یک سری از آشکارسازها است که قادر به شناسایی ویژگی های خاص منحصر به فرد برای انواع مختلف سلول است. تعلیق تک سلولی رویدادهای پراکندگی نور منحصر به فردی را ایجاد می کند که زمانی رخ می دهد که هر سلول از نور لیزر عبور می کند. این رویدادهای اولیه مشخصه اندازه و شکل سلول، و همچنین شدت سیگنالی است که توسط رنگ‌های خاص تولید می‌شود، بنابراین الگوهایی ایجاد می‌کنند که نوع سلول را منعکس می‌کنند.

اساس کار فلوسایتومتری
اساس کار فلوسایتومتری

سیگنال های آشکارسازها تقویت شده و به کامپیوتر ارسال می شوند. آنها به داده های قابل خوانش دیجیتالی تبدیل می شوند که روی صفحه کامپیوتر یا در یک چاپ نمایش داده می شوند. داده ها معمولاً به صورت نمودار نمایش داده می شوند.

نمونه-های-از-خروجی-دیتا-های-فلوسایتومتری
نمونه های از خروجی داده های فلوسایتومتری

این تجزیه و تحلیل امکان ارزیابی انواع و تعداد سلول ها در نمونه را فراهم می کند. فلوسایتومتر به اندازه کافی حساس است تا سلول ها یا ذرات کوچکی به قطر یک میکرون را تجزیه و تحلیل کند و می تواند در اندازه های نسبتاً کوچک نمونه انجام شود. هزاران سلول را می توان در چند دقیقه شمارش و تجزیه و تحلیل کرد و تصویر بسیار دقیقی از ترکیب سلولی هر بافت یا مایع بدن ارائه می دهد.

یکی از عملکردهای اضافی فلوسایتومتر، توانایی جداسازی فیزیکی انواع سلول های منحصر به فرد بر اساس ویژگی های ذکر شده در بالا است. هنگامی که یک نمونه از نور لیزر و آشکارسازها عبور کرد، یک بار الکتریکی می تواند به سلول های مورد نظر اعمال شود. این زمانی اتفاق می افتد که یک نمونه سیال به قطراتی که دارای بار الکتریکی مثبت یا منفی هستند شکسته می شود و سپس توسط صفحات انحرافی با بار مخالف منحرف می شود. سپس سلول های مورد نظر را می توان به صورت فیزیکی در رگ های جداگانه برای آزمایش بیشتر جمع آوری کرد.

چه چیزی در آزمایش فلوسایتومتری مورد بررسی قرار می گیرد؟

ایمونوفنوتایپ توسط فلوسیتومتری یک روش آزمایشگاهی است که وجود یا عدم وجود نشانگرهای گلبول سفید (WBC) به نام آنتی ژن را تشخیص می دهد. این آنتی ژن ها ساختارهای پروتئینی هستند که روی WBC یا درون آنها یافت می شوند. گروه‌بندی‌های خاصی از این آنتی‌ژن‌ها معمولاً روی یا درون سلول‌های سفید خون وجود دارند و منحصر به انواع سلول‌ها و مراحل بلوغ سلولی هستند.

علاوه بر این، الگوهای خاصی از آنتی ژن‌ها روی سلول‌های غیرطبیعی که در لوسمی‌ها و لنفوم‌ها دیده می‌شوند، وجود دارد. ایمونوفنوتایپ فلوسیتومتری ممکن است در کمک به تشخیص، طبقه بندی، درمان و تعیین پیش آگهی این سرطان های سلول خونی مفید باشد.

لوسمی ها و لنفوم ها توسط یک گلبول سفید غیر طبیعی ایجاد می شوند که شروع به تقسیم غیرقابل کنترل می کند و کپی های متعددی از خود می سازد (کلون). سلول‌های غیرطبیعی رشد می‌کنند، اما با عفونت‌ها مبارزه نمی‌کنند یا عملکردهای دیگری مانند WBCs طبیعی را انجام نمی‌دهند. آنها با سرعت طبیعی نمی میرند، بنابراین در مغز استخوان، غدد لنفاوی یا سایر بافت ها تجمع می یابند.

با افزایش تعداد سلول‌های غیرطبیعی در مغز استخوان، ممکن است از تولید گلبول‌های سفید، گلبول‌های قرمز و پلاکت‌های سالم جلوگیری کنند و در نهایت سلول‌های غیرطبیعی نیز ممکن است در خون آزاد شوند. با افزایش تعداد سلول های غیر طبیعی در یک گره لنفاوی، اندازه غدد لنفاوی افزایش می یابد. گاهی اوقات لنفوم خون و/یا مغز استخوان را نیز درگیر می کند.

اگر سرطان خون یا لنفوم دارید، آزمایش‌های معمول مانند شمارش کامل خون (CBC) و شمارش افتراقی WBC ممکن است افزایش تعداد گلبول‌های سفید خون با غلبه یک نوع را نشان دهد. این آزمایش ها ممکن است نشان دهنده لنفوم یا لوسمی باشد، اما به طور کلی برای تایید تشخیص و شناسایی نوع خاصی از لوسمی یا لنفوم به اطلاعات بیشتری نیاز است.

فلوسیتومتری ایمونوفنوتایپینگ ممکن است بر روی نمونه های خون، مغز استخوان یا سایر نمونه ها برای ارائه این اطلاعات اضافی انجام شود. می‌تواند سلول‌های طبیعی و همچنین سلول‌های غیرطبیعی را که الگوی نشانگرهای آنها معمولاً با انواع خاصی از لوسمی و لنفوم دیده می‌شود، شناسایی کند. همچنین می‌توان از نتایج برای پیش‌بینی میزان تهاجمی سرطان و/یا پاسخ به درمان خاص استفاده کرد.

گاهی اوقات، نمی توانید بگویید که در زیر میکروسکوپ به چه نوع توموری نگاه می کنید. برای مثال، در لوسمی حاد، برخی موارد دارای ویژگی‌های متمایز هستند (مانند میله‌های اور) که به شما می‌گوید نوع لوسمی چیست – اما در موارد دیگر هیچ سرنخ خاصی ندارید.

در مواردی که سرنخ ها حداقل هستند – به ویژه در نئوپلاسم های خونساز یا لنفوئیدی – می توانید فلوسیتومتری را انجام دهید تا ببینید چه مارکرهایی روی سطح سلول ها وجود دارد. برای مثال، در یک مورد لوسمی با ظاهری ملایم، اگر فلوسیتومتری انجام دادید و دیدید که سلول‌ها CD 13 و CD 33 را بیان می‌کنند، می‌دانید که سلول‌ها میلوئید هستند و به احتمال زیاد این یک لوسمی میلوئیدی حاد است.

مزیت بزرگ فلوسیتومتری این است که امکان تشخیص همزمان چندین نشانگر را در یک سلول واحد می دهد. با یک فلوسایتومتر مدرن، 8 تا 10 رنگ مختلف را می توان به راحتی در یک نمونه اندازه گیری کرد، پیشرفته ترین سیتومترها حتی می توانند تا 18 کانال را به طور همزمان اندازه گیری کنند.

دانستن برخی از این نشانگرها ممکن است ایده خوبی باشد. شما قبلاً چند مورد را می‌شناسید: برای مثال CD3 یک نشانگر CD است که روی سطح همه سلول‌های T بالغ قرار دارد، CD4 روی سلول‌های T کمکی و CD8 روی سلول‌های T سیتوتوکسیک است. بیش از 350 نشانگر CD وجود دارد، بنابراین بدیهی است که لازم نیست تک تک آنها را بدانید. اما برخی از آنها به قدری رایج استفاده می شوند که احتمالاً برای شما مفید است که بدانید آنها چیست و چگونه استفاده می شوند.

در اینجا لیستی از نشانگرهای پرکاربرد آمده است. برخی از نشانگرها در بیش از یک مورد استفاده می شوند (به عنوان مثال، CD15 هم روی سلول های Reed-Sternberg و هم در نوتروفیل ها وجود دارد). توجه داشته باشید که آنها در اکثر موارد به ترتیب عددی فهرست شده اند. همچنین توجه داشته باشید که گاهی اوقات فقدان یک نشانگر است که به شما در تشخیص کمک می کند. به عنوان مثال، اگر یک نئوپلاسم لنفوئیدی دارید که در آن سلول‌ها کوچک و بالغ به نظر می‌رسند، و با جریان آن سلول‌ها CD5 مثبت اما CD23 منفی هستند، می‌توانید لوسمی لنفوسیتی مزمن را که CD5 و CD23 مثبت و لاغر است رد کنید. برای تشخیص لنفوم سلول گوشته

بیشتر آنتی ژن هایی که ایمونوفنوتایپ فلوسیتومتری تشخیص می دهد با شماره CD (خوشه های تمایز) شناسایی می شوند .اعداد CD نشان دهنده یک قرارداد نامگذاری است که بر اساس اجماع بین المللی است.

مولکول‌های CD نشانگرهای سطح سلولی هستند که برای شناسایی و شناسایی لکوسیت‌ها و زیرجمعیت‌های مختلف لکوسیت‌ها بسیار مفید هستند.ایده اولیه پشت نامگذاری CD طبقه بندی بسیاری از آنتی بادی های مونوکلونال مختلف علیه مولکول های سطح سلولی لکوسیت ها بود که توسط آزمایشگاه های مختلف در سراسر جهان تولید شده بودند. تعداد نشانگرهای CD به طور مداوم افزایش یافته و به انواع سلول های دیگر گسترش یافته است. امروزه بیش از 320 خوشه CD در انسان توصیف شده است.

cluster of differentiation
cluster of differentiation

آنتی بادی های اختصاصی نشانگر CD به طور گسترده برای مرتب سازی سلولی، شناسایی و تشخیص سرطان خون استفاده می شوند. علاوه بر این، نشانگرهای CD اهمیت قابل توجهی برای درمان سرطان پیدا کرده اند. برخی از داروهای آنتی بادی درمانی برای هدف قرار دادن سلول‌هایی طراحی شده‌اند که نوع خاصی از نشانگر CD دارند (مانند ریتوکسیماب به CD20 برای درمان لنفوم و لوسمی؛ آلمتوزوماب به CD52 برای لوسمی لنفوسیتی مزمن و درمان لنفوم سلول T).

در حالی که صدها آنتی ژن شناسایی شده اند و دارای یک شماره CD منحصر به فرد هستند، تنها تعداد کمی از آنها به طور معمول استفاده می شوند.

دانستن برخی از این نشانگرها ممکن است ایده خوبی باشد. شما قبلاً چند مورد را می‌شناسید: برای مثال CD3 یک نشانگر CD است که روی سطح همه سلول‌های T بالغ قرار دارد، CD4 روی سلول‌های T کمکی و CD8 روی سلول‌های T سیتوتوکسیک است. بیش از 350 نشانگر CD وجود دارد، بنابراین بدیهی است که لازم نیست تک تک آنها را بدانید. اما برخی از آنها به قدری رایج استفاده می شوند که احتمالاً برای شما مفید است که بدانید آنها چیست و چگونه استفاده می شوند.

در اینجا لیستی از نشانگرهای پرکاربرد آمده است. برخی از نشانگرها در بیش از یک مورد استفاده می شوند (به عنوان مثال، CD15 هم روی سلول های Reed-Sternberg و هم در نوتروفیل ها وجود دارد). توجه داشته باشید که آنها در اکثر موارد به ترتیب عددی فهرست شده اند.

  • CD1a، CD207: سلول های هیستیوسیتوز سلول لانگرهانس
  • CD2، CD3، CD4، CD5، CD7، CD8: سلول های T
  • CD10: سلول های اولیه pre-B (سلول های B نابالغ)
  • CD11c، CD25، CD103، CD123: سلول های لوسمی سلول مویی
  • CD13، CD33، CD117: سلول های میلوئیدی
  • CD14، CD64: سلول های مونوسیتی (مثبت در AML-M4 و AML-M5)
  • CD15: سلول های رید-استرنبرگ، نوتروفیل ها
  • CD16، CD56: سلول های کشنده طبیعی(Natural Killer (NK) cells)
  • CD19، CD20، CD21، CD22: سلول های B
  • CD23 و CD5: لوسمی لنفوسیتی مزمن/لنفوم لنفوسیتی کوچک
  • CD23 منفی و CD5 مثبت: سلول های لنفوم سلول گوشته
  • CD30 و CD15: سلول های Reed-Sternberg
  • CD30 مثبت و CD15 منفی: سلول های لنفوم سلول بزرگ آناپلاستیک
  • CD31: سلول های اندوتلیال (مثبت در آنژیوسارکوم)، مگاکاریوسیت ها و پلاکت ها
  • CD33: سلول های میلوئیدی و پیش سازها
  • CD34: سلول های بنیادی (همچنین در آنژیوسارکوم مثبت)
  • CD41، CD61: مگاکاریوسیت ها و پلاکت ها (مثبت در AML-M7)
  • CD45: تمام لکوسیت ها (به جز سلول های Reed-Sternberg!)
  • CD45 RO: سلول های T حافظه
  • CD45 RA: سلول های T ساده
  • CD56: سلول های کشنده طبیعی  (NK)
  • CD56 سلول های پلاسما در میلوما (CD56+) را از پلاسماسیتوزیس واکنشی یا MGUS (CD56-) متمایز می کند
  • CD68: هیستوسیت ها (مثبت در هیستوسیتوز فیبری بدخیم)
  • CD79a: تشخیص عمومی سلول های B / منشا سلول B (با CD20)
  • CD79b: سلول های B، سلول های پلاسما و اختلالات لنفوپرولیفراتیو
  • CD99: سلول های سارکوم یووینگ
  • CD117: لوسمی میلوئید حاد (AML) و GIST
  • CD200: یک نشانگر مفید برای تمایز بین CLL (مثبت) و MCL (منفی)

همچنین توجه داشته باشید که گاهی اوقات فقدان یک نشانگر است که به شما در تشخیص کمک می کند. به عنوان مثال، اگر یک نئوپلاسم لنفوئیدی دارید که در آن سلول‌ها کوچک و بالغ به نظر می‌رسند، و با جریان آن سلول‌ها CD5 مثبت اما CD23 منفی هستند، شما می توانید لوسمی لنفوسیتی مزمن را که CD5 و CD23 مثبت است و به تشخیص لنفوم سلول گوشته(mantle cell lymphoma) تمایل دارد، رد کنید.

CD سطح سلول های B و T
CD مارکر های سطح سلول های B و T

اندیکاسیون های پزشکی برای انجام فلوسیتومتری در زمینه نئوپلاسم های خونساز را می توان به چهار دسته اصلی تقسیم کرد:

1. تشخیص و طبقه بندی نئوپلاسم های خونساز. توانایی شناسایی دقیق زیرجمعیت‌های غیرطبیعی سلول‌ها، تعیین نسل و تعیین مرحله بلوغ، تکرارپذیری بهتری را به تشخیص نئوپلاسم‌های خونساز می‌افزاید، به‌ویژه برای اختلالات لنفوپرولیفراتیو مزمن و لوسمی‌های حاد. فلوسیتومتری به طور گسترده برای این اهداف استفاده می شود.

2. تشخیص آنتی ژن های مورد استفاده به عنوان اهداف درمانی. در حال حاضر انواعی از معرف‌های ایمونولوژیک برای استفاده درمانی در دسترس هستند که به طور خاص آنتی ژن‌های بیان شده توسط نئوپلاسم‌های خونساز (مانند CD19، CD20، CD22، CD25، CD33، CD52) را هدف قرار می‌دهند. تأیید بیان آنتی ژن مورد نظر توسط تومور اغلب یک پیش نیاز ضروری برای استفاده از این درمان های گران قیمت است.

3. تشخیص سلول های نئوپلاستیک باقی مانده پس از درمان. توانایی فلوسیتومتری برای شناسایی و تعیین کمیت حضور سلول‌های خونساز غیرطبیعی با حساسیت 0.01% یا بهتر، به طور فزاینده‌ای به عنوان یک معیار جایگزین برای پاسخ به درمان و عود قریب‌الوقوع در انواع نئوپلاسم‌های خونساز مورد استفاده قرار می‌گیرد.

4. ارزیابی فنوتیپ های آنتی ژنی خاص مرتبط با پیش آگهی. این شاید بحث برانگیزترین نشانه های ذکر شده باشد و در بسیاری از موجودیت های بیماری به صورت تئوری و فرضیه است. با این حال، بیان مولکول‌های خاص بر روی جمعیت نئوپلاستیک با نتایج بالینی در برخی تنظیمات مرتبط است. به عنوان مثال، CD56 در موارد لوسمی پرومیلوسیتیک حاد، CD20 در لوسمی لنفوبلاستیک حاد بزرگسالان (ALL)، و CD49d در لوسمی لنفوسیتی مزمن (CLL)، همه به عنوان عوامل پیش آگهی نامطلوب گزارش شده اند. در برخی تنظیمات تأثیر پیش آگهی ارائه شده توسط فلوسیتومتری را می توان با امضای ژنتیکی به حساب آورد. بنابراین، زمانی که کل زمینه ژنتیکی مشخص نیست، باید در تفسیر نتایج روی بیماران فردی دقت شود.

عوامل مداخله گر در آزمایش فلوسایتومتری:

  • نشان داده شده است که نیکوتین و ورزش بسیار شدید تعداد لنفوسیت ها را کاهش می دهند. با این حال، اکنون چنین داده هایی مورد تردید قرار گرفته اند.
  • استروئیدها می توانند تعداد لنفوسیت ها را افزایش دهند.
  • داروهای سرکوب کننده سیستم ایمنی تعداد لنفوسیت ها را کاهش می دهند.

مطلب پیشنهادی: تداخلات دارویی در آزمایش ها

اهمیت بالینی آزمایش فلوسایتومتری

افزایش سطح سلول های خونی:

  • لوسمی لنفوسیتی مزمن
  • لنفوم سلول B: می توان انتظار داشت که این بیماران تعداد لنفوسیت های B را در بافت تومور یا خون محیطی خود افزایش دهند.
  • لنفوم سلول T: می توان انتظار داشت که این بیماران تعداد لنفوسیت های T را در بافت تومور یا خون محیطی خود افزایش دهند (اگر مغز استخوان آنها به شدت درگیر تومور باشد)
  • یا انواع اختلالات شلول های خونی که موجب افزایش جمعیت خاصی از سلول ها می شوند.

کاهش سطح سلول های خونی:

  • بیماران پیوند عضو: کاهش تعداد لنفوسیت ها برای سرکوب سیستم ایمنی رد عضو مورد انتظار و مطلوب است.
  • بیماران HIV مثبت: هنگامی که تعداد CD4 کمتر از 200 میلی متر مکعب باشد، بیمار در معرض خطر افزایش علائم بالینی ناشی از ایدز و عفونت های فرصت طلب همراه با این بیماری است.
  • نقص ایمنی مادرزادی: کودکان مبتلا به سندرم دی جورج و هیپوپلازی تیموس، لنفوسیت های B کاهش یافته یا بدون آن هستند.

سوالات متداول

چگونه از نتایج آزمایش فلوسایتومتری استفاده می شود؟

ایمونوفنوتایپینگ فلوسیتومتری اساساً برای کمک به تشخیص و طبقه بندی سرطان های سلولی خون (لوسمی ها و لنفوم ها) و کمک به هدایت درمان آنها استفاده می شود. ممکن است در پیگیری شمارش کامل خون (CBC) و شمارش افتراقی WBC که افزایش تعداد لنفوسیت ها یا وجود سلول های خونی نابالغ یا سایر تعداد سلول های غیر طبیعی را نشان می دهد استفاده شود.

فلوسیتومتری ایمونوفنوتایپ نیز ممکن است مورد استفاده قرار گیرد:

  • برای پیش بینی میزان تهاجمی سرطان
  • برای پیش بینی اینکه آیا سرطان به درمان خاصی پاسخ می دهد یا خیر
  • برای کمک به تعیین اینکه آیا درمان لوسمی یا لنفوم موفقیت آمیز بوده است
  • برای تعیین اینکه آیا بیماری با وجود درمان (بیماری باقیمانده) باقی می ماند یا پس از درمان موفقیت آمیز عود کرده است (بیماری عود کننده)

فلوسیتومتری در شناسایی انواع سلول های منحصر به فرد برای بیماری های خاص استفاده شده است. یکی از رایج ترین آنها در تشخیص سرطان های مرتبط با خون مانند لوسمی و لنفوم است. آنتی بادی های مونوکلونال بسیار خاص که به فلوروکروم متصل شده اند برای تشخیص وجود یا عدم وجود اجزای مختلف سلولی که معمولاً در انواع خاصی از سرطان ها دیده می شوند، استفاده می شوند.

این اطلاعات در تشخیص، پیش آگهی و درمان این بیماری ها استفاده می شود. این به ویژه در مراحل اولیه یک بیماری بدخیم که در آن ممکن است تنها تعداد کمی سلول سرطانی در نمونه وجود داشته باشد مفید است و ممکن است با معاینه معمولی زیر میکروسکوپ شناسایی نشود

چه زمانی آزمایش فلوسایتومتری درخواست می شود؟

فلوسیتومتری ایمونوفنوتایپینگ ممکن است زمانی درخواست شود که:

  • افزایش تعداد لنفوسیت‌ها (یا گاهی اوقات افزایش نوع دیگری از گلبول‌های سفید خون)
  • کم خونی های شدید
  • کاهش تعداد پلاکت‌ها
  • کاهش گلبول‌های سفید
  • حضور گلبول‌های سفید نابالغ که به طور معمول در خون دیده نمی‌شوند

اینها ممکن است اولین نشانه سرطان سلول خونی احتمالی باشد.

آزمایش ممکن است زمانی انجام شود که علائم و نشانه های لوسمی و لنفوم داشته باشید، اگرچه ممکن است در اوایل بیماری غیرقابل توجه، خفیف یا غیر اختصاصی باشند.

نمونه هایی از علائم و نشانه های سرطان سلول خونی عبارتند از:

  • احساس خستگی یا فرسودگی، ضعف
  • کاهش وزن یا اشتهای غیرقابل توجیه
  • تنگی نفس در طول فعالیت بدنی معمولی
  • پوست رنگپریده
  • خونریزی یا کبودی به راحتی
  • تب
  • درد استخوان و مفاصل
  • بزرگ شدن غدد لنفاوی، طحال، کبد، کلیه ها و/یا بیضه ها
  • سردرد
  • استفراغ
  • عرق شبانه
  • همچنین ممکن است پس از درمان لوسمی یا لنفوم، آزمایش انجام شود.
علائم و نشانه های سرطان سلول خونی
علائم و نشانه های سرطان سلول خونی

نتیجه آزمایش فلوسایتومتری چه چیزی را نشان می دهد؟

یک پاتولوژیست، که اغلب متخصص در مطالعه بیماری های خونی و/یا سرطان سلول های خونی است (یک هماتوپاتولوژیست)، نتایج حاصل از شمارش کامل خون (CBC)، شمارش افتراقی، اسمیر خون، یافته های مغز استخوان و ایمونوفنوتیپ فلوسیتومتری را در نظر می گیرد. و همچنین سایر آزمایش ها به منظور ارائه یک تفسیر تشخیصی. یک گزارش آزمایشگاهی معمولاً شامل نتایج خاص از آزمایش‌ها و همچنین تجزیه و تحلیلی از معنای آن نتایج است.

CD مارکرها که بر روی سلول ها وجود دارند، همانطور که توسط ایمونوفنوتایپ فلوسیتومتری شناسایی می شوند، به شناسایی سلول های موجود کمک می کنند. یک سلول نرمال الگویی از آنتی ژن ها را نشان می دهد که با نوع و بلوغ سلول ارتباط دارد. (سلول‌های خونی معمولاً در مغز استخوان بالغ می‌شوند و زمانی که بالغ یا تقریباً بالغ می‌شوند به گردش در می‌آیند.) نتایج حاصل از ایمونوفنوتایپینگ شما با الگوی آنتی‌ژن‌های سلول‌های «طبیعی» و همچنین با الگوهایی که با سلول های غیرطبیعی مرتبط هستند، مقایسه می‌شود.

پزشک شما نتایج ایمونوفنوتایپ فلوسیتومتری را همراه با سابقه بالینی، معاینه فیزیکی، علائم و نشانه‌ها و همچنین تمام آزمایش‌های برای کمک به تشخیص در نظر می‌گیرد.

شرایط هر فرد منحصر به فرد خواهد بود. شما ممکن است آنتی ژن های خاصی داشته باشید (یا فاقد آن) باشید که به طور معمول دیده می شوند، اما هنوز ممکن است نوع خاصی از لوسمی یا لنفوم در شما تشخیص داده شود.

در اینجا یک مثال است:

خون یک کودک یا بزرگسال به طور معمول حاوی تعدادی سلول B بالغ است، اما سلول های B نابالغ در حال گردش معمولا وجود ندارند.

هر دو سلول B بالغ و نابالغ معمولاً برای نشانگر CD19 مثبت هستند.

سلول های B بالغ معمولاً برای CD20 مثبت هستند اما CD34 نیستند. CD20 نشانگر بلوغ و CD34 نشانگر عدم بلوغ است. در واقع، این دو نشانگر معمولاً با هم بیان نمی شوند.

حال، اگر یک فرد بالغ دارای تعداد کمی سلول B بالغ باشد، اما تعداد زیادی سلول B نابالغ نیز داشته باشد که برای CD19مثبت هستند (به یاد داشته باشید، CD19 یک نشانگر سلول B است) و همچنین برای CD34 و CD20 (که مشخص می کند) مثبت است. آن سلول‌ها نابالغ و غیرطبیعی هستند، سپس فرد مبتلا به لوسمی سلول B نابالغ است که به عنوان لوسمی لنفوبلاستیک B شناخته می‌شود.

لوسمی لنفوبلاستیک B
لوسمی لنفوبلاستیک B

جالب توجه است، برخی از آنتی ژن های دیگر موجود ممکن است نشان دهنده یک زیرگروه ژنتیکی خاص از لوسمی لنفوبلاستیک B باشد، که همچنین ممکن است پیش آگهی خاصی داشته باشد.

مهمتر از آن، کلاس‌های جدیدتری از گزینه‌های درمانی مانند درمان CAR-T، درگیرکننده‌های سلول‌های T دوگانه، و آنتی‌بادی‌های مونوکلونال وجود دارد که به‌طور انتخابی مولکول‌هایی مانند CD19 یا CD20 را هدف قرار می‌دهند. این درمان های جدیدتر ممکن است در مقایسه با شیمی درمانی معمولی عوارض جانبی کمتری داشته باشند

پروفایل های غیر طبیعی ایمونوفنوتیپ معمولاً در موارد زیر وجود دارد:

  • لوسمی میلوئید حاد
  • لوسمی لنفوبلاستیک حاد (ALL)
  • لوسمی لنفوسیتی مزمن (CLL)
  • لنفوم غیر هوچکین سلول B و T
  • مولتیپل میلوما

CD مارکرهایی که اغلب در انواع خاصی از سلول ها بیان می شوند:

نوع سلولCD مارکر
سلول های پیش ساز نابالغCD34, CD117, TdT
لنفوسیت های BCD19, CD20, CD22, CD79a, immunoglobulin light chains (kappa or lambda)
لنفوسیت های TCD2, CD3, CD5, CD7, and either CD4 or CD8
سلول های میلوئیدی (گرانولوسیت ها)MPO (myeloperoxidase), CD13, CD33
سلول های کشنده طبیعی (NK)CD16, CD56

موارد زیر CD مارکرهایی را که انواع خاصی از تمایز سلولی را پیشنهاد می کنند، خلاصه می کند:

CD مارکرهاسلول ها
CD41, CD42b, CD61تمایز مگاکاریوسیتی؛ پلاکت ها
CD235aتمایز گلبول قرمز (اریتروئید)
CD11b, CD14, CD33, HLA-DRتمایز مونوسیتی
CD11c, CD25, CD103لوسمی سلول مویی

آیا چیز دیگری هست که باید بدانم؟

تجزیه و تحلیل زیر مجموعه لنفوسیت T بر اساس بیان CD3، CD4 و CD8 به طور جداگانه برای نظارت بر افراد مبتلا به HIV/AIDS انجام می شود

آیا دلیلی وجود دارد که یک نوع نمونه (خون، مغز استخوان یا بافت) را به جای دیگری برای آزمایش انتخاب کنیم؟

نوع نمونه ای که باید آزمایش شود به  محل درگیری سلول ها و نطر پزشک شما بستگی دارد. اگر سلول های غیرطبیعی در جریان خون وجود داشته باشند، نمونه خون اغلب برای تعیین ایمونوفنوتایپ فلوسیتومتری استفاده می شود، زیرا به راحتی به دست می آید و نسبت به سایر روش های جمع آوری کمتر تهاجمی است. با این حال، سلول های لنفوم ممکن است راه خود را به جریان خون پیدا کنند یا نکنند و ممکن است به تکنیک های جمع آوری دیگری نیاز داشته باشند.

آیا می توان آزمایش فلوسایتومتری را در آزمایشگاه های محلی انجام داد؟

بستگی دارد. آزمایش فلوسایتومتری در هر آزمایشگاهی ارائه نمی شود، اما بسیاری از بیمارستان های بزرگ، مراکز پزشکی دانشگاهی و آزمایشگاه های خصوصی بزرگ آزمایش را انجام می دهند یا نمونه شما ممکن است به آزمایشگاه مرجع ارسال شود.

آیا می توان از نتایج آزمایش فلوسایتومتری برای تعیین سیر سرطان استفاده کرد؟

تشخیص لوسمی یا لنفوم بر اساس معاینه بصری اسمیر خون و/یا بیوپسی مغز استخوان و آسپیراسیون برای وجود انواع خاصی از سلول است. بسته به نتایج ایمونوفنوتایپ فلوسیتومتری، یک پزشک ممکن است تعیین کند که سرطان شما تا چه حد به درمان پاسخ می دهد و درمان تا چه حد ممکن است تهاجمی باشد. دوره درمان سرطان شما توسط پزشک و تیم او بر اساس ایمونوفنوتایپ فلوسیتومتری و سایر آزمایش هایی که ممکن است انجام شود، تعیین می شود.

آیا CD مارکرهای سطح WBC ها تغییر می کنند؟

بستگی دارد. آنتی ژن های روی سلول های سرطان خون یا لنفوم خاص ممکن است در طول زمان ثابت بمانند. با این حال، درمان با شیمی درمانی ممکن است سلول های غیرطبیعی را از بین ببرد و اگر درمان موفقیت آمیز باشد، گلبول های سفید طبیعی (WBCs) جایگزین سلول های غیر طبیعی می شوند.

به همین دلیل، نتایج ایمونوفنوتایپ با انعکاس جمعیت فعلی WBCs که در یک فرد در حال بهبودی وجود دارد، متفاوت خواهد بود. با این حال، گاهی اوقات، سلول‌های سرطانی با بیان نکردن آنتی ژنی که قبلاً بیان کرده‌اند، خود را برای فرار از درمان سازگار می‌کنند، که ممکن است توسط یک آنتی‌بادی مونوکلونال یا درمان دیگری مانند سلول‌های T CAR مورد هدف قرار گرفته باشد.

آیا روش دیگری برای ایمونوفنوتایپ استفاده می شود؟

می توان اسلایدهای حاوی بخش‌های فیکس شده بافت را با آنتی‌بادی که مخصوص نوعی آنتی‌ژن خاص است که معمولاً روی سلول‌های غیرطبیعی مرتبط با سرطان خون یا لنفوم خاص یافت می‌شوند، رنگ آمیزی کرد. این آنتی‌بادی‌ها اغلب با یک شاخص فلورسنت یا یک نشانگر شیمیایی مرتبط هستند که این سلول‌های غیرطبیعی را با مشاهده زیر میکروسکوپ قابل مشاهده می کنند.

این روش که ایمونوهیستوشیمی نامیده می شود، برای برخی از نشانگرهای لوسمی و لنفوم و سایر انواع سرطان استفاده می شود. ممکن است به این دلیل باشد که نشانگرهای مورد نطر برای روش فلوسیتومتری در دسترس نباشند یا سلول ها یا بافت های تازه در دسترس نیستند (الزامی برای ایمونوفنوتایپ فلوسیتومتری که نمونه بایستی تازه باشد).

مطالب مرتبط در متااورگانون:

در جای دیگر وب:

منابع مورد استفاده در این مطلب

Seiter, K. (2018 July 17, Updated). Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL). Medscape Hematology. Available online at https://emedicine.medscape.com/article/207631-overview. Accessed January 2020.

Kanwar, V. et. al. (2019 January 3, Updated). Pediatric Acute Lymphoblastic Leukemia. Medscape Pediatrics: General Medicine. Available online at https://emedicine.medscape.com/article/990113-overview. Accessed January 2020.

(2018 March 12). Acute Lymphoblastic Leukemia. NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology. Available online at https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/all.pdf. Accessed January 2020.

Lamb, A. et. al. (2019 January, Updated).Acute Lymphoblastic Leukemia – ALL. ARUP Consult. Available online at https://arupconsult.com/content/acute-lymphoblastic-leukemia. Accessed January 2020.

(2018 October 17, Revised). Tests for Acute Lymphocytic Leukemia (ALL). American Cancer Society. Available online at https://www.cancer.org/cancer/acute-lymphocytic-leukemia/detection-diagnosis-staging/how-diagnosed.html. Accessed January 2020.

(2016 February 3, Revised). How Is Childhood Leukemia Diagnosed? American Cancer Society. Available online at https://www.cancer.org/cancer/leukemia-in-children/detection-diagnosis-staging/how-diagnosed.html. Accessed January 2020.

(© 2015). Blood Tests. Leukemia & Lymphoma Society. Available online at https://www.lls.org/managing-your-cancer/lab-and-imaging-tests/blood-tests#Immunophenotyping. Accessed January 2020.

Craig, F. and Foon, K. (2008 April 15). Flow cytometric immunophenotyping for hematologic neoplasms. Blood Journal v111 (8) [On-line information]. Available online at http://bloodjournal.hematologylibrary.org/content/111/8/3941.full. Accessed April 2011.

Jaffe, E. et. al. (2008 December 1). Classification of lymphoid neoplasms: the microscope as a tool for disease discovery. Blood. 2008 December 1; 112(12): 4384–4399. [On-line information]. Available online at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2954680/. Accessed April 2011.

(Updated 2011 March 13). Blood Tests. Leukemia & Lymphoma Society [On-line information]. Available online through http://www.lls.org. Accessed April 2011.

Torpy, J. (2009 January 28). Acute Lymphoblastic Leukemia. JAMA Patient Page V301 (4) [On-line information]. PDF available for download at http://jama.ama-assn.org/content/301/4/452.full.pdf. Accessed April 2011.

Bahler, D. (Updated 2011 February). Lymphoma Phenotyping. ARUP Consult [On-line information]. Available online at http://www.arupconsult.com/Topics/LymphomaPhenotyping.html. Accessed April 2011.

(© 1995–2011). Unit Code 3287: Leukemia/Lymphoma Immunophenotyping by Flow Cytometry. Mayo Clinic, Mayo Medical Laboratory [On-line information]. Available online at http://www.mayomedicallaboratories.com/test-catalog/Overview/3287. Accessed April 2011.

(Reviewed 2010 December). Lymphoid Neoplasms Laboratory Support of Diagnosis and Management Test Guide. Quest Diagnostics [On-line information]. Available online at http://www.questdiagnostics.com/hcp/intguide/jsp/showintguidepage.jsp?fn=TG_Lymphoid_Neoplasms.htm. Accessed April 2011.

Wittwera, C. and Brown, M. (2000). Flow Cytometry: Principles and Clinical Applications in Hematology Clinical Chemistry 46:8(B) 1221–1229 [On-line information]. Available online at http://www.clinchem.org/cgi/content/full/46/8/1221. Accessed April 2011.

Mayo Clinic Staff (2010 November 24). Chronic lymphocytic leukemia. MayoClinic [On-line information]. Available online at http://www.mayoclinic.com/health/chronic-lymphocytic-leukemia/DS00565. Accessed April 2011.

Acute Leukemia. Merck Manual for Healthcare Professionals [On-line information]. Available online at http://www.merckmanuals.com/professional/sec11/ch142/ch142b.html. Accessed April 2011.

Pagana, K. D. & Pagana, T. J. (© 2011). Mosby’s Diagnostic and Laboratory Test Reference 10th Edition: Mosby, Inc., Saint Louis, MO. Pp 244-247.

Wu, A. (© 2006). Tietz Clinical Guide to Laboratory Tests, 4th Edition: Saunders Elsevier, St. Louis, MO. Pp 1633-1711.

Chen, Y. (Updated 2014 March 23). B-cell leukemia/lymphoma panel. MedlinePlus Medical Encyclopedia [On-line information]. Available online at http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003518.htm. Accessed December 2014.

(© 1995–2014). Leukemia/Lymphoma Immunophenotyping by Flow Cytometry. Mayo Clinic Mayo Medical Laboratories [On-line information]. Available online at http://www.mayomedicallaboratories.com/test-catalog/Overview/3287. Accessed December 2014.

Maecker, H. et. al. (2012 February 17). Standardizing immunophenotyping for the Human Immunology Project. Nat Rev Immunol v12 (3): 191–200. [On-line information]. Available online at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3409649/. Accessed December 2014.

(Reviewed 2013 July 10). Leukemia – Acute Lymphocytic (Adults). American Cancer Society [On-line information]. Available online at http://www.cancer.org/acs/groups/cid/documents/webcontent/003109-pdf.pdf. Accessed December 2014.

(2013 December 11). Understanding Laboratory Tests. National Cancer Institute [On-line information]. Available online at http://www.cancer.gov/cancertopics/factsheet/detection/laboratory-tests. Accessed December 2014.

(Revised 2012). Understanding Lab and Imaging Tests. Leukemia & Lymphoma Society [On-line information]. Available online through http://www.lls.org. Accessed December 2014.

دکتر فرزاد باباخانیمشاهده نوشته ها

PHD ویروس‌شناسی پزشکی از دانشگاه علوم پزشکی تهران

بدون دیدگاه

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *